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Uso de hibridização fluorescente in situ (FISH) na identificação de Chlamydia sp. em tecido hepático de aves silvestres nativas e exóticas

Authors
  • Piccoli, Ronaldo José
Publication Date
Oct 08, 2020
Source
Repositório Digital Institucional da UFPR
Keywords
License
Unknown

Abstract

Orientadora: Profa. Dra. Aline de Marco Viott / Coorientador: Prof. Me. Anderson Luiz de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa : Palotina, 20/03/2020 / Inclui referências: p. 58-64 / Resumo: A clamidiose, é umas das afecções de caráter zoonótico mais importante das aves, a doença cosmopolita, listada em diversas espécies animais, inclusive no ser humano. No Brasil, os dados epidemiológicos sobre clamidiose são escassos, principalmente devido à dificuldade de diagnóstico ou acesso a esse. O uso de técnicas diagnósticas eficazes e rápidas são de grande valia pois possibilitam o controle adequado da doença. O objetivo desse trabalho foi aplicar a técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH) para o diagnóstico de Chlamydia sp. em tecidos hepáticos fixados em formol de aves silvestres e exóticas. Cortes histológicos do fígado de 137 aves foram examinados por histopatologia e por FISH. As amostras foram divididas em grupos retrospectivos (n=57) composto por aves diversas e prospectivos (n=80) formado exclusivamente por Columba livea. A sonda foi sintetizada com base em uma sequência de anelamento correspondente a um segmento do gene codificador MOMP (Major Outer Membrane Protein) de Chlamydia sp., e foi constituída de 20 bases e acrescida do fluorocromo Alexa Fluor 555. Os controles positivos foram oriundos de tecidos hepáticos de aves positivas para Chlamydia psittaci pelas técnicas de PCR e imuno-histoquímica. A alteração predominante na microscopia hepática do grupo retrospectivo foi hepatite necrótica linfohistiocitária e heterofílica com 25% (14/57), seguidos de 9% (5/57) para congestão e para colestase, 5% (3/57) para fibrose portal associada a hiperplasia de ductos biliares, seguidas de outras de menor frequência. A ausência de lesões foi observada em 39% (22/57) dos casos. No grupo prospectivo as lesões mais observadas foram as de hepatite necrótica linfohistioplasmocitária e heterofílica correspondentes a 60% (48/80) dos casos, seguido de 14% (11/80) de vacuolização citoplasmática associada a congestão, 8% (5/80) para vacuolização citoplasmática associada a congestão e colestase, seguido de outros de menor frequência. A ausência de lesões foi observada em 4% (3/80) dos casos. Das amostras testadas, 67% (92/137) foram positivas pela técnica da FISH. A positividade foi distribuída em oito Ordens e 16 diferentes espécies de aves. Além disso, de todos os casos avaliados, apenas 1% (2/137) apresentaram manifestações clínicas, lesões macroscópicas e/ou lesões microscópicas sugestivas de Clamidiose, sendo essas pertencentes a espécimes de Amazona aestiva (Papagaio-verdadeiro). Na avaliação subjetiva do número de organismos marcados por campo, foi observado que 42% (39/92) das amostras continham até cinco marcações por campo (+), 14% (13/92) continham de seis a dez marcações por campo (++) e 43% (40/92) continham mais que 11 marcações por campo (+++). A técnica de FISH foi específica e eficaz para identificar Chlamydia sp. em corte de tecidos hepáticos de aves, representando uma nova técnica a ser usada para o diagnóstico da clamidiose aviária. Palavras-chave: Clamídia, diagnóstico, patologia, zoonose, saúde única. / Abstract: Chlamydiosis is one of the most important zoonotic diseases of birds, the cosmopolitan disease, listed in several animal species, including humans. In Brazil, epidemiological data on chlamydiosis are scarce, mainly due to the difficulty of diagnosis or access to it. The use of effective and rapid diagnostic techniques is of great value as they enable adequate control of the disease. The objective of this work was to apply the fluorescent in situ hybridization (FISH) technique for the diagnosis of Chlamydia sp. in liver tissues fixed in formaldehyde from wild and exotic birds. Histological sections of the liver of 137 birds were examined by histopathology and FISH. The samples were divided into retrospective groups (n = 57) composed of diverse birds and prospective (n = 80) formed exclusively by Columba livea. The probe was synthesized based on an annealing sequence corresponding to a segment of the MOMP (Major Outer Membrane Protein) encoding gene of Chlamydia sp., and was made up of 20 bases and added by the fluorochrome Alexa Fluor 555. The positive controls came from liver tissues of birds positive for Chlamydia psittaci by PCR and immunohistochemistry techniques. The predominant change in liver microscopy of the retrospective group was lymphohistiocytic and heterophilic necrotic hepatitis with 25% (14/57), followed by 9% (5/57) for congestion and cholestasis, 5% (3/57) for associated portal fibrosis bile duct hyperplasia, followed by others of lesser frequency. The absence of injuries was observed in 39% (22/57) of the cases. In the prospective group, the most frequently observed lesions were lymphohistioplasmocytic and heterophilic necrotic hepatitis corresponding to 60% (48/80) of the cases, followed by 14% (11/80) of cytoplasmic vacuolization associated with congestion, 8% (5/80) for cytoplasmic vacuolization associated with congestion and cholestasis, followed by others of lesser frequency. The absence of injuries was observed in 4% (3/80) of the cases. Of the samples tested, 67% (92/137) were positive by the FISH technique. Positivity was distributed in eight Orders and 16 different species of birds. In addition, of all the cases evaluated, only 1% (2/137) presented clinical manifestations, macroscopic lesions and/or microscopic lesions suggestive of Chlamydiosis, these belonging to specimens of Amazona aestiva (Turquoise-fronted Parrot). In the subjective evaluation of the number of organisms marked per field, it was observed that 42% (39/92) of the samples contained up to five markings per field (+), 14% (13/92) contained six to ten markings per field (+ +) and 43% (40/92) contained more than 11 markings per field (+++). The FISH technique was specific and effective in identifying Chlamydia sp. in section of liver tissues of birds, representing a new technique to be used for the diagnosis of avian chlamydiosis. Key-words: Chlamydia, Diagnosis, Pathology, Zoonosis, One health.

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