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MISE EN EVIDENCE ET CARACTERISATION D'ACTIVITES RGI-GALACTOSYLTRANSFERASES DANS UNE SUSPENSION CELLULAIRE DE LIN (LINUM USITATISSIMUM L.)

Authors
  • PEUGNET, ISABELLE
  • MORVAN, CLAUDINE
Publication Date
Jan 01, 2001
Source
OpenGrey Repository
Keywords
Language
French
License
Unknown

Abstract

LES RHAMNOGALACTURONANES DE TYPE I (RGI) SONT DES COMPOSES PECTIQUES IMPORTANTS DES PAROIS PRIMAIRES DES CELLULES VEGETALES. LES RGI SONT DIFFEREMMENT SUBSTITUES PAR DES CHAINES LATERALES PLUS OU MOINS LONGUES ET RICHES EN GALACTOSE. D'APRES MOHNEN (1999), TROIS TYPES DE GALACTOSYLTRANSFERASES SONT IMPLIQUES DANS L'INITIATION ET L'ELONGATION DES CHAINES DES BETA (14) GALACTANES RAMIFIANT LES RGI PLUSIEURS GALACTOSYLTRANSFERASES, CAPABLES DE TRANSFERER UN RESIDU GALACTOSYLE A PARTIR D'UDP-GALACTOSE SUR UN ACCEPTEUR POLYSACCHARIDIQUE, ONT ETE SOLUBILISEES A PARTIR D'UNE FRACTION MICROSOMALE DE CELLULES DE LIN (LINUM USITATISSIMUM L.) AVEC DU CHAPS 0,5%. L'UTILISATION DU RGI DE LIN COMME SUBSTRAT EXOGENE POUR STIMULER L'ACTIVITE GALACTOSYLTRANSFERASE SOLUBILISEE A PERMIS LA MISE EN EVIDENCE D'UNE ACTIVITE RGI-GALACTOSYLTRANSFERASE DANS CES CELLULES. UN TEST ENZYMATIQUE A ETE MIS AU POINT PAR CHROMATOGRAPHIE D'EXCLUSION STERIQUE POUR MESURER SPECIFIQUEMENT LES PRODUITS DE LA RGI-GALACTOSYLTRANSFERASE. EN UTILISANT UNE RGLYASE OU UNE RGHYDROLASE PURIFIEE, LES PRODUITS RADIOMARQUES ONT ETE CARACTERISES COMME ETANT UN RGI POLYMERIQUE. A PH 8 EN PRESENCE DE 5 MM DE CACL 2, LES RESIDUS BETA GALACTOSYLES SONT TRANSFERES SPECIFIQUEMENT SUR UN RGI RAMIFIE PAR DE COURTES CHAINES LATERALES DE BETA (14) GALACTANES, QUI PEUVENT ETRE HYDROLYSES PAR UNE -GALACTOSIDASE OU UNE ENDO-BETA (14)-GALACTANASE. UNE ACTIVITE GALACTOSYLTRANSFERASE DE TYPE II A DONC ETE IDENTIFIEE DANS DES SUSPENSIONS CELLULAIRES DE LIN. CETTE RGI-GALACTOSYLTRANSFERASE A UNE TEMPERATURE OPTIMALE DE 30\C ET EST INACTIVEE AU DELA DE 48\C. LE KM APPARENT POUR L'UDP-GALACTOSE ET LE RGI EXOGENE EST RESPECTIVEMENT DE 460 40 M ET 1,1 0,1 MG ML 1 ET LE VMAX EST DE 3,0 0,5 PKAT MG 1 DE PROTEINES. LA RGI-GALACTOSYLTRANSFERASE POSSEDE AU MOINS DEUX ISOFORMES, L'UNE NEUTRE ET L'AUTRE BASIQUE. LES SOUS-UNITES CATALYTIQUES POTENTIELLES DE L'ENZYME AURAIENT UNE MASSE MOLECULAIRE COMPRISE ENTRE 25 000 ET 50 000. DES ESSAIS DE PURIFICATION SUR GELS D'AFFINITE AINSI QUE DES EXPERIENCES DE PHOTO-MARQUAGE, COUPLEES A DIFFERENTES TECHNIQUES ELECTROPHORETIQUES (SDS-PAGE, ISOFOCALISATION ELECTRIQUE EN AGAROSE ET ELECTROPHORESE BIDIMENSIONNELLE), ONT PERMIS D'IDENTIFIER PLUSIEURS SPOTS PROTEIQUES POUVANT CORRESPONDRE A UNE GALACTOSYLTRANSFERASE. UN SEQUENCAGE DE CES SPOTS PERMETTRA DE CONFIRMER CES HYPOTHESES. / ROUEN-BU Sciences (764512102) / Sudoc / Sudoc / France / FR

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