Design of reagentless fluorescent biosensors from artificial ankyrin repeat proteins and of bioconjugates for early diagnosis of flaviviral infections / Biocapteurs fluorescents autonomes dérivés d'ankryines artificielles et bioconjugués pour le diagnostic précoce d'infections flavivirales

Les biocapteurs fluorescents autonomes (FA) sont des molécules fixatrices d antigènes couplées à un fluorophore, dont l intensité de fluorescence varie avec la fixation de l antigène, ce qui permet sa détection instantanée et quantitative. Nous avons cherché à obtenir des biocapteurs FA à partir de n'importe quelle ankyrine artificielle (Darpin). Des règles de conception ont été développées pour identifier les positions auxquelles un fluorophore pouvait être couplé, en présence ou absence de données structurales. Ces stratégies ont été validées pour deux Darpins dirigées contre la protéine MalE d E.Coli.Pour améliorer les tests diagnostiques d infections flavivirales, nous avons construit des bioconjugués entre le domaine 3 de la protéine d enveloppe de plusieurs flavivirus et la phosphatase alcaline d E.coli. Nous avons évalué l efficacité de 5 conjugués, correspondant aux 4 sérotypes du virus la Dengue (DENV1-4) et au virus de la Fièvre Jaune, dans nos tests simplifiés de MAC- et GAC-ELISA, pour 200 sérums humains. Les infections récentes étaient détectées par MAC-ELISA, avec une bonne sensibilité et spécificité, excepté pour DENV4. / PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / Sudoc / PARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / Sudoc / Sudoc / France / FR