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Développement et implémentation d'une approche par fragments pour le design d'ARNs modifiés simple brin avec évaluation sur des protéines de liaison à l'ARN et un modèle d'étude la Bêta-Sécrétase 1

Authors
  • Yacoub, Taher
Publication Date
Jan 17, 2024
Source
HAL-Descartes
Keywords
Language
French
License
Unknown
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Abstract

De nouvelles stratégies thérapeutiques ont émergé grâce aux aptamères qui sont des ligands à haute affinité générés par une méthode expérimentale appelée SELEX. Toutefois, leur utilisation demeure limitée en raison de leur manque de sélectivité et de leur liaison à d'autres cibles. Ces effets hors-cibles ("off-target") sont fréquemment observés dans toutes les stratégies thérapeutiques basées sur l'ARN. Pour accroître leur spécificité et sélectivité, des aptamères modifiés chimiquement in situ ont été générés par SELEX (SOMAmers). Néanmoins, des limitations techniques de SELEX persistent notamment dans le nombre et le type de modifications chimiques utilisables. Nous proposons donc une stratégie de conception in silico d'oligonucléotides modifiés pour s'affranchir de certaines de ces limitations. Pour ce faire, nous avons développé une nouvelle méthode de reconstruction d'ARN simple brin (ARNsb) basée sur l'approche par fragments, sur la connaissance 3D de la structure cible et sur la technique du Color-Coding développé par Alon, Yuster et Zwick. Celle-ci repose sur une modélisation de la connectivité des poses sous la forme d'un graphe permettant la mise en œuvre d'un algorithme combinatoire efficace par programmation dynamique. Cette approche est implémentée pour le « Docking » (recherche du mode de liaison natif) à partir d'une distribution donnée de fragments, pour le « Design » thérapeutique de-novo d'un ARNsb et pour l'analyse statistique de caractéristiques afin d'obtenir des informations entre les poses et la protéine (par exemple, l'analyse de profils de séquence ou la probabilité d'une pose d'appartenir à une chaine ARNsb). Cette nouvelle approche a fait l'objet d'une preuve de concept sur sept complexes ARNsb/protéines et a démontré des résultats pertinents, robustes et exploitables dans une perspective de design.Pour mettre à l'épreuve cette nouvelle méthodologie, une étude de cas a été faite sur l'enzyme Beta-Sécrétase 1 (BACE1, impliquée dans la maladie d'Alzheimer) et son homologue Beta-Sécrétase 2 (BACE2) afin de concevoir un ARNsb sélectif de BACE1. Pour ce faire, une étude a été réalisée afin de déterminer les caractéristiques clés de la spécificité et sélectionner des nucléotides modifiés pouvant se lier aux sites et sous-sites fonctionnels de BACE-1. Ces résultats pourront servir de base pour le design d'ARNsb sélectif et pour l'évaluation de la méthodologie basée sur le Color-Coding.

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