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Estudos de otimização da produção de bioinseticida bacteriano a partir do isolamento de nova linhagem de Bacillus thuringiensis

Authors
Publisher
Biblioteca Digital da Unicamp
Publication Date
Keywords
  • Bacillus Thuringiensis
  • Aedes Aegypti
  • Biotecnologia

Abstract

O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e a otimização da produção de bioinseticida bacteriano a partir do isolamento e seleção de uma linhagem de Bacillus thuringiensis que apresentasse uma diferenciada e alta atividade inseticida contra larvas de mosquitos de importância na saúde pública. A partir de amostras de solo, isolou-se uma bactéria entomopatogênica, denominada SP-36. Este isolado apresentou uma atividade de 30.767 ITU/mg, contra larvas de Aedes aegypti quase duas vezes mais alta que a linhagem padrão B. thuringiensis israelensis IPS-82, e foi classificado taxonomicamente como sendo um Bacillus thuringiensis. Na sorotipagem do isolado, este foi classificado como uma cepa autoglutinante de B.t.. O perfil electroforético das proteínas que compõem os cristais do isolado (110, 68, 38 e 25 kDa) apresentou significativa diferenças com os polipeptídios produzidos pela linhagem padrão. A otimização das condições fermentativas foram planejadas através da Metodologia por Superfícies de Resposta (MSR) com um delineamento experimental 34. Os resultados experimentais demonstraram uma resposta de 1,37 x 108 para contagem de esporos, completa lise celular e atividade de 35.000 ITU/mg, utilizando-se meio basal em condições de 30°C, 350 rpm, 5 % de inóculo e 7,2 de pH inicial. Para seleção dos componentes de meio de cultura à base de sub-produtos agro-industriais, foram utilizados fatoriais fraccionários, permitindo a seleção das fontes de carbono, nitrogênio e suplementos minerais, assim como o ajuste preliminar das concentrações dos componentes. foram selecionados os seguintes componentes: melaço, água de maceração de milho, água de levedura e fosfato de potássio. Para a otimização da concentração dos componentes selecionados utilizou.:se de delineamento central composto 54 da metodologia por superfícies de resposta, obtendo-se contagem de 1,28 x 108 esporos/ml, em 24 horas com um meio otimizado: 3,5g/l de melaço, 7,O g/l de água de maceração de milho, 16g/l de água de levedura e 6,O g/l de fosfato de potássio. Foram realizados testes de escalamento, com 30 e 50 % de oxigênio dissolvido, obtendo-se velocidades específicas de crescimento de 0,25 e.0,51 h-1, e contagem de esporos de 1,76 e 1,96 x 109 esp/ml respectivamente, em 24 e 18 horas.

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