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Clonación y expresión de genes implicados en la biosíntesis de poliquétidos de Streptomyces halstedii

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Abstract

Esta tesis doctoral estudió un fragmento de ADN Pstl de 2,6 kb que hibrida específicamente con ACTI. En primer lugar, se secuenció y caracterizó, revelándose la existencia de dos pautas abiertas de lectura completas (ORFB y ORF1) y otras dos incompletas (ORFA y ORF2). Las ORF1 y ORF2 forman una -cetoacil sintetasa heterodimérica, cuyo centro activo es un residuo de cisteína. Las ORFB y ORFA tienen función desconocida hasta el momento. En segundo lugar, se llevó a cabo la expresión obtenido sólo era detectado mediante el marcaje utilizando S-metionina. Al modificar los tripletes 2 y 6, para adecuarlos a un mejor uso de codones para E. coli se incrementó el nivel de expresión en ambos casos. En tercer lugar, se llevó a cabo un experimento de disrupción génica en otra zona del ADN de S. halstedii, a la izquierda del fragmento estudiado, demostrándose que dicho fragmento también participa en el proceso de biosíntesis del pigmento de la espora de S. halstedii y cuya alteración da lugar a un fenotipo lila.

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