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Efecto de la fijación en la calidad del ADN: estudio controlado con cinco fijadores

Authors
Journal
Revista Española de Patología
1699-8855
Publisher
Elsevier
Publication Date
Volume
39
Issue
3
Identifiers
DOI: 10.1016/s1699-8855(06)70034-4
Keywords
  • Fijación
  • Formalina
  • Etanol 70%
  • Reacción En Cadena De La Polimerasa
  • Pcr
  • Fixation
  • Formalin
  • 70% Ethanol
  • Polymerase Chain Reaction

Abstract

Resumen Antecedentes Los tejidos fijados y embebidos en parafina son una fuente importante de material para diagnóstico e investigación. La amplificación de ADN desde este tipo de tejidos, mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es afectada por el tipo de fijador y los tiempos de fijación empleados. Para determinar el parámetro que mejor se adecue a las condiciones de trabajo de nuestro laboratorio de Patología Molecular, evaluamos el efecto de cinco fijadores sobre la calidad del ADN bajo condiciones controladas. Material y Método Muestras de mucosa gástrica fueron fijadas, embebidas en parafina y luego procesadas para extracción de ADN empleando un protocolo basado en digestión con proteinasa K. La calidad del ADN se evaluó mediante amplificación de tres fragmentos del gen β-globina (268, 536 y 989 pb). Resultados No observamos mayores diferencias entre fijadores ni tiempos de fijación en la amplificación de ADN de 268 y 536 pb. No obstante, la amplificación del fragmento mayor (981 pb) se vio alterada al aumentar el tiempo de fijación, a excepción de aquellas muestras fijadas en etanol 70% que presentaron una banda de similar intensidad a la obtenida para muestras control (tejido fresco congelado). Conclusiones Estos resultados nos proporcionan una pauta para el diseño de experimentos de acuerdo a la calidad del material archivado, optimizando recursos humanos e insumos.

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