Affordable Access

Publisher Website

Purification et mécanisme d'action d'une galactokinase végétale

Authors
Journal
Biochimie
0300-9084
Publisher
Elsevier
Publication Date
Volume
58
Issue
5
Identifiers
DOI: 10.1016/s0300-9084(76)80218-0
Keywords
  • Enzymologie

Abstract

Résumé La galactokinase des graines de Fenugrec précédemment décrite, a été purifiée par chromatographie d'affinité sur galactosamine-CH Sepharose, support qui assure une plus grande spécificité que l'ATP-Sepharose. La purification réalise un enrichissement de 400 fois avec un rendement de 80 p. cent en une seule étape. Les K m pour le galactose et pour le complexe Mg-ATP 2− sont respectivement de 0,54 × 10 −3 M et 5 × 10 −3 M. Le galactose-1-phosphate se révèle inhibiteur compétitif vis-à-vis du galactose alors que l'inhibition vis-à-vis du complexe Mg-ATP 2− n'est pas compétitive. Le complexe Mg-ADP est un inhibiteur non compétitif vis-à-vis du galactose et vis-à-vis du complexe Mg-ATP 2−. De plus, le K m de l'enzyme pour le complexe Mg-ATP 2− est modifié par l'utilisation de substrats différents du galactose, le désoxy 2− et le désoxy 6- d -galactose. L'ensemble de ces résultats tend à montrer que la réaction catalysée par cette galactokinase obéit à un mécanisme séquentiel ordonné, le galactose étant le premier substrat fixé par l'enzyme, le complexe Mg-ATP 2− n'intervenant qu'ensuite. La libération des produits de réaction a lieu dans l'orde : Mg-ADP puis galactose-1-phosphate. L'affinité de l'enzyme pour le désoxy-6- d -galactose est très inférieure à celle pour le désoxy-2- d -galactose, ce qui révèle au moment de la fixation du sucre sur l'enzyme, une intervention plus importante de l'hydroxyle en position 6 que ne l'est celle de l'hydroxyle en position 2.

There are no comments yet on this publication. Be the first to share your thoughts.