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白藜芦醇对炎症所致椎间软骨终板退变中高迁移率蛋白1信号的影响

Authors
  • HU, Hua
  • LI, Liantai
  • LIU, Yanwei
  • WANG, Shujun
  • XIE, Shuangxi
  • SUN, Jianjun
Type
Published Article
Journal
Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery
Publisher
四川大学华西医院
Publication Date
Apr 01, 2022
Volume
36
Issue
4
Pages
461–469
Identifiers
DOI: 10.7507/1002-1892.202110084
PMID: 35426287
PMCID: PMC9011066
Source
PubMed Central
Keywords
Disciplines
  • 论 著
License
Unknown

Abstract

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对炎症所致椎间软骨终板(cartilage endplate,CEP)退变的作用,以及对高迁移率蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)信号的调控机制。 方法 提取3周龄SD大鼠椎间CEP细胞,并采用甲苯胺蓝染色、兔抗大鼠Ⅱ型胶原蛋白细胞免疫荧光染色进行鉴定;采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)筛选RES对椎间CEP细胞的最佳浓度;采用基因芯片分析确定RES对椎间CEP细胞的作用靶点。分别以IL-1β构建炎症所致椎间CEP细胞退变模型和7~8周龄SD大鼠椎间盘退行性病变模型,并以pcDNA3.1-HMGB1(pcDNA3.1)作为RES作用的对照,分别以流式细胞术和TUNEL染色检测椎间CEP细胞和大鼠椎间盘组织中椎间CEP细胞的凋亡率;ELISA试剂盒检测细胞上清液和大鼠血清中IL-10和TNF-α的含量;Western blot检测HMGB1、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)、磷酸化ERK(phosphorylated ERK,p-ERK)、 B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B cell lymphoma/leukemia 2 gene,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)蛋白表达。 结果 经鉴定所提取细胞为大鼠椎间CEP细胞;CCK-8法筛选出以30 μmol/L RES处理椎间CEP细胞时活性最高;经基因芯片分析确定HMGB1-ERK信号为RES的作用靶点。细胞实验和动物实验均显示,RES处理均能明显下调椎间CEP细胞的凋亡率,抑制TNF-α的释放,升高IL-10的含量;并明显下调HMGB1、p-ERK和Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;且pcDNA3.1能部分逆转RES的上述作用,差异均有统计学意义( P <0.05)。 结论 RES能明显抑制炎症诱导的椎间CEP细胞凋亡,这与抑制HMGB1的表达有关。

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